Ей там! Като доставчик наРъчно работна станция на ELISA, Видях от първа ръка колко разочароващо може да се справи с променливостта на вътрешността в тест на ELISA на ръчна работна станция. Но не се притеснявайте, аз съм тук, за да споделя някои съвети и трикове, които да ви помогнат да намалите тази променливост и да получите по -надеждни резултати.
Разбиране на вътрешно - променливостта на анализата
Първо, нека поговорим за това каква е променливостта на анализа. Това е основно разликата в резултатите, които получавате, когато стартирате една и съща проба няколко пъти в рамките на един анализ. Това може да бъде истинска болка във врата, защото е трудно да се доверите на вашите данни. Има куп фактори, които могат да причинят тази променливост, като грешки в пипета, непоследователни времена на инкубация и температурни колебания.
Грешки в пипета
Петиването е една от най -критичните стъпки в теста на ELISA, а също така е и един от най -големите източници на променливост. Дори малка грешка в обема на пробата или реагента, който пипетата, може да окаже голямо влияние върху вашите резултати. За да намалите грешките на пипета, уверете се, че използвате висококачествени пипети, които са правилно калибрирани. Също така, отделете време, когато се пипете. Не бързайте през процеса и се уверете, че следвате правилната техника. Например, дръжте пипетата вертикално и потопете върха до правилната дълбочина.
Друго нещо, което можете да направите, е да практикувате уменията си за пипетиране. Повечето производители на пипети предлагат учебни материали или дори ръце - на тренировъчни сесии. Възползването от тези ресурси наистина може да ви помогне да подобрите техниката си и да намалите грешките.
Несъответстващи времена на инкубация
Инкубацията е друга стъпка, при която променливостта може да пропълзи. Ако пробите се инкубират за различни времена, това може да доведе до разлики в свързването на антитела и антигени. За да осигурите последователни времена на инкубация, използвайте таймер и задайте ясни напомняния. Уверете се, че всички кладенци в чинията ви са инкубирани за точно същия период от време.
Също така е добра идея да използвате добре изолиран инкубатор. Температурните колебания по време на инкубацията могат да повлияят на реакционната кинетика, така че поддържането на температурата е от решаващо значение. Проверявайте редовно температурата на вашия инкубатор, за да се уверите, че той е в препоръчителния диапазон.
Температурни колебания
Температурата играе огромна роля в тестовете на ELISA. Ако температурата е твърде висока или твърде ниска, това може да повлияе на свързването на антитела и антигени, както и активността на ензимите. За да сведете до минимум колебанията на температурата, дръжте вашите реагенти и проби при препоръчителната температура, преди да започнете анализа. Ако работите в студена стая, оставете реагентите да се затоплят бавно до стайна температура и внимателно ги смесват преди употреба.
Също така, опитайте се да работите в температура, контролирана. Избягвайте да поставяте работната си станция в близост до прозорци, въздушни отвори или други източници на промяна на температурата. Ако е възможно, използвайте температурен шкаф или инкубатор с вградена система за наблюдение на температурата.
Стандартизиране на вашия протокол
Един от най -добрите начини за намаляване на вътрешната променливост е да стандартизирате протокола си. Това означава да следвате едни и същи стъпки в един и същ ред всеки път, когато провеждате тест на ELISA. Ето някои неща, които трябва да вземете предвид, когато стандартизирате вашия протокол:
Подготовка на реагенти
Уверете се, че правилно подготвяте реагентите си. Следвайте внимателно инструкциите на производителя и използвайте правилните обеми и концентрации. Етикетирайте ясно реагентите си и ги съхранявайте при препоръчителната температура. Когато приготвяте реагенти, използвайте прясна вода и висококачествени химикали.
Измиване на чиния
Измиването на чинията е важна стъпка за отстраняване на несвързани вещества от кладенците. Несъответстващото измиване може да доведе до променливост във вашите резултати. Използвайте табела, ако е възможно, и се уверете, че е зададена на правилните параметри. Ако измиете ръчно чиниите, използвайте последователна техника. Например, попълнете всяка кладенец до едно и също ниво и се аверогазирайте по същия начин.
Обработка на проби
Работете внимателно с пробите си, за да избегнете замърсяване и деградация. Използвайте чисти тръби и накрайници за пипета и съхранявайте пробите си при препоръчителната температура. Ако разреждате пробите си, уверете се, че използвате правилния коефициент на разреждане и смесвате добре пробите.
Използване на проби за контрол на качеството
Пробите за контрол на качеството са проби с известни стойности, които изпълнявате заедно с вашите тестови проби. Те ви помагат да наблюдавате ефективността на вашия анализ и да откриете всички проблеми, които могат да причинят променливост. Уверете се, че използвате проби за контрол на качеството и ги стартирайте в множество реплики.
Анализирайте редовно резултатите от вашите проби за контрол на качеството. Ако забележите значителни отклонения от очакваните стойности, това може да е знак, че има проблем с вашия анализ. Изследвайте проблема и предприемете коригиращи действия, като например калибриране на пипетите си или коригиране на времето за инкубация.
Ролята на вашата работна станция
Като доставчик наРъчно работна станция на ELISA, Мога да ви кажа, че наличието на добра работна станция е от решаващо значение за намаляване на променливостта на вътрешността. Нашите работни станции са предназначени да осигурят стабилна и последователна среда за вашите ELISA тестове. Те са изработени от висококачествени материали, които са устойчиви на химикали и температурни промени.
Работната повърхност е плоска и ниво, което помага да се осигури точна пипета. Ние също така предлагаме незадължителни аксесоари, като контролирани от температурата блокове и шейкъри на плочи, които могат допълнително да подобрят работата на вашия анализ. Ако все още използвате стара или ненадеждна работна станция, може да е време да помислите за надграждане.
Свързани работни станции
Ако участвате в други видове анализи, като PCR или клетъчен анализ, ние също предлагамеPCR или QPCR Ръчна работна станцияиРъководство за анализ на клетките. Тези работни станции са проектирани със същото внимание към детайлите и качеството като нашите работни станции на ELISA и те могат да ви помогнат да намалите променливостта и в тези анализи.
Опаковане
Намаляването на вътрешно -променливостта на теста на ELISA на ръчна работна станция отнема време и усилия, но определено си заслужава. Следвайки съветите, които споделих, като например намаляване на грешките в тръбопровода, стандартизиране на вашия протокол, използване на проби за контрол на качеството и с добра работна станция, можете да получите по -надеждни и последователни резултати.
Ако се интересувате да научите повече за нашитеРъчно работна станция на ELISAИли някой от другите ни продукти, бихме искали да чуем от вас. Свържете се с нас, за да започнете разговор за вашите нужди и как можем да ви помогнем да подобрите ефективността на анализа си.
ЛИТЕРАТУРА
- Bishop, ML, Fody, EP, & Schoeff, LE (2018). Клинична химия: техники, принципи, корелации. Wolters Kluwer.
- Wild, D. (Ed.). (2013). Наръчникът за имуноаналита. Elsevier.
- Обучителни материали на производителя на пипета.